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本试剂盒主要用于植物组织中的维生素C(抗坏血酸)的检测。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

是维生素C的分子结构中具有共轭双键，在酸性溶液中243nm处有最大吸收峰，在中性或碱性条件下最大吸收峰转移至265nm处，利用铜离子消除背景差异，可用酶标仪直接测定样品中的维生素C含量。

维生素C(Vitamin C)又称L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内维生素C是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果，VC有L-型和D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。

组分	规格	保存
Vitamin C标准(1.2mg/mL)	1mL	4℃避光
10×组织匀浆液	100mL	RT
Cu酸性缓冲液	25mL	4℃
VC Assay Buffer	6mL	RT

保存：4℃，避光，6个月，Vitamin C标准长期保存建议-20℃。


蒸馏水、离心管或试管、离心机、水浴锅或恒温箱、96孔板、酶标仪

• 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

• 稀释组织匀浆液：按10×组织匀浆液∶蒸馏水=1∶9的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
  
• 制备样品：取待测材料如青菜、水果以及其他组织等，清洗擦干，准确称量5g，加入研磨器内，加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入10mL离心管，补充1×组织匀浆液至10mL，充分混匀，10000g离心5min，取0.05mL上清液，即为待测液；液体样品直接检测或稀释后进行检测。
  
• 配制系列Vitamin C标准：取Vitamin C标准(1.2mg/mL)，用蒸馏水稀释至12μg/mL，4℃保存备用，取干净离心管或试管，用Vitamin C标准(12μg/mL)按下表进行操作，依次稀释。
  

  加入物(μL)	1	2	3	4	5
  Vitamin C标准(12μg/mL)	5	10	15	20	25
  蒸馏水	45	40	35	30	25
  相当于Vitamin C浓度(μg/ml)	1.2	2.4	3.6	4.8	6

  
  
• 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的Vitamin C含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
  

  加入物(μL)	空白管	标准管	测定管I	测定管II
  待测液	－	－	50	50
  Vitamin C标准(1～8号)	－	50	－	－
  蒸馏水	50	－	－	－
  Cu酸性缓冲液	200	200	200	200
  50℃水浴15min。全部转移至96孔板的孔中。
  VC Assay Buffer	50	50	50	50

  
  
• Vitamin C测定：混匀，以空白调零，酶标仪测定265nm处标准孔、测定管I、测定管II的吸光度。

以系列标准Vitamin C (1.2、2.4、3.6、4.8、6μg/mL)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程，以测定管的吸光度代入回归方程求得维生素C含量。
样品中维生素C含量(μg/5g)＝(A_I－A_II)×N×6/K
液体中维生素C含量(μg/待测样品ml数)＝(A_I－A_II)×N×6/K
A_I：测定管I的吸光度
A_II：测定管II的吸光度
N：待测样品稀释倍数
K：标准曲线斜率


参考标准曲线范围：我司测定Vitamin C标准(1～5号)在1.2、2.4、3.6、4.8、6μg/mL时，通过分光光度计测定其吸光度多0.1～0.95之间，其标准曲线如下：

注意：由于检测仪器和操作手法等条件的不同，参考值范围会有波动，该值仅供参考，对于要求精确计算VC含量的，可以采用标准曲线进行多点重复测定；根据百奥莱博测定经验显示，标准品浓度在0.6μg/mL以下以及24μg/mL以上，标准曲线会有偏差。
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